A absolvit actoria la Institutul de Artă Teatrală și Cinematografică în 1971, iar doi ani mai târziu s-a angajat la Teatrul Odeon, jucând în peste 35 de spectacole și regizând alte 15, pe diverse scene din București. În 1996, a început să predea arta actoriei la Universitatea Națională de Artă Teatrală și Cinematografică „I.L. Caragiale”, instituție pe care a condus-o ca rector, între 2000-2008. Vocea sa inconfundabilă poate fi auzită în peste 100 de piese de teatru radiofonic.
În film, a avut roluri în circa 40 de producții, colaborând cu regizori ca Lucian Pintilie, Dan Pița, Mircea Veroiu, Alexandru Tatos, Mircea Daneliuc, Manole Marcus, Andrei Blaier, Alexa Visarion, Nicolae Corjos, Nae Caranfil sau Cristi Puiu. A jucat în filme precum Actorul și sălbaticii, Mere roșii, Înainte de tăcere, De ce trag clopotele, Mitică?, Moromeții, Iacob, E pericoloso sporgersi, Moartea domnului Lăzărescu, Restul e tăcere, Killing Time și, recent, în Poziția copilului. Florin Zamfirescu a fost distins cu numeroase premii de interpretare, a primit Premiul pentru excelență în Cinematografia română (2002), precum și Ordinul Național Pentru Merit, în grad de Cavaler (2002). Este autor al cărții „Actorie sau magie” (2003). În onoarea sa, la TIFF va fi proiectat filmul Năpasta (1982), adaptarea nuvelei lui I.L. Caragiale, în regia lui Alexa Visarion, în care face un rol memorabil.
